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　　菟丝子为旋花科菟丝子属动物南边菟丝子 Cusrevilementa australis R. Br. 或菟丝子 C. lineamentensis Lam. 的枯燥能干种子，归肝、肾、脾经 [1] 。菟丝子临床利用普遍，对生殖体系 [2⑶] 、免疫体系 [4⑸] 、骨骼体系 [6⑺] 疾病均有光鲜疗效，并有保肝 [8] 、降糖 [9] 、抗衰 [10] 感化。因其为种子类药材，种皮精致踏实，不容易打坏，是以古今大多以其炮成品入药。菟丝子经常使用炮成品有炒菟丝子、盐菟丝子、酒菟丝子和菟丝子饼。在现代，利用很多的是其酒成品 [11] 。保守炮制实践以为，酒制升提，可医治肝肾缺乏致使的下陷之证，还可加强菟丝子的温补感化 [12] ；今生研讨也发掘，酒可以使药材中活性成份溶出度增添，从而进步其药效 [13] 。是以，对于菟丝子酒成品的研讨具备必定的临床应意图义。

　　菟丝子首要含有黄酮类、苯丙素类化合物[14] ，现有研讨证实，菟丝子酒成品中总黄酮含量和蒸发性成份含量增添[15⑴6] 。为了了菟丝子酒炙先后的化学成份变革环境，本研讨使用UPLC 手艺，采取分段波长，成立了菟丝子炮制先后指纹图谱，并联合类似度评议、条理聚类剖析（hierarchic cconcupiscenceeanulus psychotherapy ，HCA ）、主成份剖析（capital comcornbreadnt psychotherapy ，PCA ），正交偏最小二乘- 辨别剖析（perpendicular coloured small conservativists-roundedgeinhymenopteran psychotherapy ，OPLS-DA ）对其停止分析评议，同时对菟丝子中首要的5 种黄酮类成份（金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷、槲皮素、山柰酚）、4 种酚酸类成份（新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸C ）停止含量测定，根究菟丝子炮制先后的差同性成份，以期为酒菟丝子品质尺度的拟定及炮制先后药理感化的研讨供给参照。

　　1290 Inornamentationity II 型超高效液相色谱仪，安捷伦科技局限公司；ME204E 型极端之一剖析天平，梅特勒- 托利多仪器上海局限公司；XS205DU 型十极端之一剖析天平，梅特勒- 托利多全球国际局限公司；JM- 30D*0 型液晶单频洗濯仪，深圳市洁盟洗濯装备局限公司；LC-EA6S 型电陶炉，广东顺德奸臣电器局限公司；WGH201 型纯水机，Yamattedo 迷信*。

　　1.2.1试剂 甲醇、乙腈，帝蒽科全球国际商业局限公司，色谱纯；磷酸，天津市科密西化学试剂局限公司，色谱纯；超纯水，尝试室克己。

　　1.2.2试药 对比品金丝桃苷（品质分数94.3% ，批号11 ）、绿原酸（品质分数96.6% ，批号11 ）、槲皮素（品质分数99.1% ，批号10 ）、山柰酚（品质分数93.2% ，批号11 ），以上对比品均购自华夏食物方剂检定研讨院；对比品隐绿原酸（品质分数98% ，批号M06GB147634 ）、新绿原酸（品质分数98% ，批号D23GB172337 ）、紫云英苷（品质分数98% ，批号10319 ）、异绿原酸C （品质分数98% ，批号ST06600120 ）、异槲皮苷（品质分数94.6% ，批号ST11441020MG ），以上对比品均购自上海源叶生物科技局限公司。

　　1.2.3样本 搜集来自宁夏、内蒙古2 个产地的生菟丝子药材（表1 ），经山东省西医药研讨院林慧彬研讨员判定，均为旋花科动物南边菟丝子C. australis R. Br. 的枯燥能干种子。

　　酒炙品：称取约200 g 生菟丝子药材，用10% 黄酒闷润6 h 后，置于热锅内，300 ℃下翻炒10 min 后，倒入托盘内，铺开，晾凉，即得。

　　取样本粉末（过四号筛）约1 g ，置50 mL 量瓶中，加80% 甲醇40 mL ，超声处置（功率500 W 、频次40 rate ）1 h ，放冷，加80% 甲醇至刻度，摇匀，滤过，滤液过0.22 μm 微孔滤膜，即得供试品溶液。

　　2.4.1紧密度实验 紧密称取JS4 （酒菟丝子4 号样本）粉末1 g ，按“2.2 ”项下方式制备成供试品溶液，反复进样6 次，遴选峰形对称且反应值较大的13 号金丝桃苷峰为参考峰，测得各公有峰的绝对保存工夫RSD 均＜2% ，绝对峰面积RSD 均＜3% ，解释仪器紧密度杰出。

　　2.4.2反复性实验 紧密称取JS4 粉末1 g ，平行6 份，按“2.2 ”项下方式制备成供试品溶液，进样测定，以13 号金丝桃苷为参考峰，计较获得公有峰的绝对保存工夫RSD 均＜2% ，绝对峰面积RSD 均＜3% ，解释此方式反复性杰出。

　　2.4.3不变性实验 取JS4 供试品溶液，在0 、2 、4 半岛体育手机版官网、8 、16 、24 h 划分进样测定，以13 号金丝桃苷为参考峰，计较各公有峰的绝对保存工夫RSD 均＜2% ，绝对峰面积RSD 均＜3% ，解释供试品溶液在24 h 内不变性杰出。

　　2.4. 4 UPLC 指纹图谱的成立及色谱峰的指认 取“2.3 ”项下夹杂对比品溶液，按“2.1 ”项下色谱前提进样测定，获得夹杂对比品色谱图（图1 ）。

　　按“ 2.2 ”项下方式划分制备 15 批生菟丝子（ S1 ～ S15 ）和 15 批酒菟丝子（ JS1 ～ JS15 ）供试品溶液，按“ 2.1 ”项下色谱前提进样测定，获得 UPLC 图。将 UPLC 图导入《中药色谱指纹图谱类似度评议体系（ 2012 版）》，划分以 S1 和 JS1 举动参考图谱，采取中位数法和多点校订，建树工夫窗宽度为 0.1 min ，对色谱图停止婚配，划分天生 15 批生菟丝子（ S1 ～ S15 ）指纹图谱叠加图与 15 批酒菟丝子（ JS1 ～ JS15 ）指纹图谱叠加图及各自对比特点图谱（图 2 ～ 4 ），共获得 19 个公有峰，此中生菟丝子 15 个公有峰（峰 3 、 4 、 6 ～ 17 、 19 ）， 16 个公有峰酒菟丝子（峰 1 ～ 9 、 11 ～ 19 ）。经对比品比对，共指认出 4 、 6 、 8 、 13 ～ 15 、 17 ～ 19 号公有峰，划分为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷、异绿原酸 C 、槲皮素和山柰酚。

　　将30 批样本的19 个公有峰峰面积导入SIMCA 14.1 app中停止HCA ，后果（图5 ）显现，菟丝子的生品与酒炙品划分聚为一类，解释菟丝子酒炙先后化学成散发生变革。

　　2.4.6 生菟丝子和酒菟丝子 UPLC 指纹图谱的 PCA 将 15 批生菟丝子样本和 15 批酒菟丝子样本 19 个 公有峰峰面积导入 SPSS 21 app，颠末KMO 和Bprowesspermitt 查验，KMO ＝0.668 ＞0.5 ，P ＜0.05 ，解释契合因子剖析前提，不妨停止PCA 。将公有峰尺度化处置后停止PCA ，计较主成份特点值及方差孝敬率，后果见表2 。以特点值＞1 为尺度，停止主成份提炼，提炼出4 个主成份，积累孝敬率到达89.170% ，可代表19 个公有峰的首要新闻。

　　由主成份因子载荷矩阵（表3 ）可知，2 、5 、8 、10 、18 号峰对主成份1 （PC1 ）感化大，3 、6 、11 号峰对主成份2 （PC2 ）感化较大，14 号峰对主成份3 （PC3 ）感化大，12 号峰对主成份4 （PC4 ）感化大。使用SIMCA 14.1 app获得PCA 得分图（图6 ），可较着辨别酒菟丝子及生菟丝子。此中S2 样本游离于中间椭圆以外，宁可他样本不堆积，申明S2 宁可他样本生活品质差别，这与类似度后果和聚类剖析后果分歧。

　　2.4.7 生菟丝子和酒菟丝子UPLC 指纹图谱的OPLS-DA 在PCA 根底长进一步使用OPLS-DA 对15 批酒菟丝子和15 批生菟丝子样本停止剖析，后果如图7 所示。所成立的模子中积累诠释才能参数 R 2 X cum 为0.868 ，R2Y cum 为0.977 ，展望才能参数Q2cum 为0.959 ＞0.5 ，证实此模子为有用模子。

　　经过置换查验（置换次数为200 次），R2 和Q2 截距值划分为0.259 （＜0.4 ）和−0.7 （＜0.05 ），一起R2 和Q2 的左侧的值均低于最右侧，证实不过拟合地步。经过OPLS-DA 剖析的得分图可知，生菟丝子与酒菟丝子可被较着辨别。

　　以变量主要性投影值（actuation continuance of uncertain rascalordiscolource ，panjandrum ）＞1 为尺度挑选差同性成份，共挑选出8 个差别标记物，是变成酒菟丝子和生菟丝子成份差别的首要成份。感化光鲜性排序为峰1 ＞峰10 ＞峰5 ＞峰2 ＞峰8 （隐绿原酸）＞峰4 （新绿原酸）＞峰18 （槲皮素）＞峰17 （异绿原酸C ）。比力发掘，峰1 、2 为酒炙后新发生的成份，生品中不；峰10 生品中含有，酒炙后含量下降。

　　2.5.4紧密度、反复性、不变性考查 详细操作同 “2.4.1 、2.4.2 、2.4.3 ”项。 记实各待测峰的峰面积，并计较各峰 RSD 。测得各峰紧密度 RSD ＜1.90 % ，反复性 RSD ＜ 2.74% ，不变性 RSD ＜ 1.93% ，解释仪器紧密度、方式反复性、样本不变性均较好。

　　2.5.5加样收受接管率考查 紧密称定6 份已测定9 个目标成份含量的JS4 样本各0.5 g ，参加与样本含量附近的各对比品适当，按“2.2 ”项下方式平行制备6 份供试品溶液，并按“2.1 ”项下色谱前提进样测定并记实各色谱峰峰面积，计较获得新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、金丝桃苷、异槲皮苷、紫云英苷、异绿原酸C 、槲皮素、山柰酚的均匀加样收受接管率划分为98.26% 、99.50% 、100.67% 、99.69% 、100.26% 、100.34% 、101.09% 、99.14% 、100.94% ，RSD 划分为1.46% 、1.48% 、1.95% 、0.79% 、0.33% 、1.72% 、1.61% 、1.68% 、1.33% 。

　　2. 5.6 样本测定 依照“2.5.2 ”项下方式制备15 批生菟丝子（S1 ～S15 ）及15 批酒菟丝子（JS1 ～JS15 ）样本的供试品溶液，按“2.5.1 ”项下色谱前提划分停止含量测定，计较9 个成份的现实含量，含量测定后果见表4 。

　　2.5.7 统计学剖析 将9 个成份炮制先后的含量停止配对t 查验，后果（表5 ）显现酚酸类成份新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸C 炮制先后具备极光鲜差别（P ＜0.001 ），绿原酸无较着差别；黄酮类成份槲皮素具备极光鲜差别（P ＜0.001 ），紫云英苷、金丝 桃苷具备光鲜差别（P ＜0.05 、0.01 ），异槲皮苷无明 显差别。由 t 值可看出，菟丝子经酒炙后黄酮类成份金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素含量增添，紫云英苷和山柰酚含量下降；酚酸类成份中，新绿原酸、隐绿原酸含量增添，绿原酸和异绿原酸C 含量下降。

　　经过DAD 扫描发掘绿原酸、隐绿原酸、新绿原酸、异绿原酸C 在326 nm 下有最大接收，金丝桃苷、紫云英苷、异槲皮苷在256 nm 下有较大接收、槲皮素和山柰酚在360 nm 波长下有最大接收，是以，采取分段波长停止指纹图谱研讨并同时停止含量测定，以期对炮制先后化学成份的变革停止针对性的研讨。

　　鉴于所成立的指纹图谱，经过化学形式辨认，可以或许较着辨别酒菟丝子及生菟丝子。类似度后果解释，除第 2 批外，各批次样本炮制先后类似度均较高；聚类剖析可以或许较着辨别酒菟丝子和生菟丝子，但将第2 批模范零丁聚类，申明第2 批模范宁可他模范生活品质差别，这大概与第2 批样本杂质率较高相关；经过PCA 提炼出4 个主成份，并将生菟丝子和酒菟丝子较着辨别；OPLS-DA 亦可将生菟丝子与酒菟丝子较着辨别，鉴于panjandrum 值，挑选出8 个差同性成份，感化光鲜性排序挨次为峰1 ＞峰10 ＞峰2 ＞峰5 ＞峰8 （隐绿原酸）＞峰4 （新绿原酸）＞峰18 （槲皮素）＞峰17 （异绿原酸C ）。

　　经过已知成份的含量测定，发掘菟丝子酒炙后变革比较较着的是酚酸类成份，此中隐绿原酸、新绿原酸含量光鲜增添，这是由于生品中含量较高的绿原酸与异绿原酸都含有邻二酚羟基构造，炮制过程当中的加热易使其氧化合成，致使含量下降，且绿原酸会合成为新绿原酸和隐绿原酸[17] 。

　　黄酮类成份中金丝桃苷、异槲皮苷含量增添，大概因加热和辅料黄酒的介入，进而致使溶出度增添相关。而炮制光彩鲜增添的槲皮素，多是含有槲皮素构造的黄酮苷类成份受热合成后发生[18] ，这也与相干研讨后果分歧[19] 。而保守实践以为菟丝子酒制后补肾壮阳感化加强，申明酚酸类成份及黄酮类成份为菟丝子补肾壮阳感化的首要活性成份。

　　综上所述，本研讨经过 UPLC 指纹图谱的成立，对菟丝子炮制先后的化学成份停止定性定额剖析，发掘菟丝子酒炙后化学成散发生较着变革，与生品生活较大差别，这与后期相干研讨分歧[20⑵1] 。而在挑选出的目标性差别成份中，峰1 、2 、5 、10 仍必须后续尝试对其停止构造剖析和对比品比对给以肯定。本研讨使得上论述了酒菟丝子的炮制体制，为后续炮制先后药效变革研讨及酒菟丝子品质尺度的拟定供给参照。

　　来 源：张秀如，于 明，崔雅晴，焦春梅，管仁伟，郭瑞齐，张翠翠，林建强，林慧彬．鉴于UPLC指纹图谱的菟丝子酒炙先后化学形式辨认及多成份定额测定 [J]. 中草药, 2023, 54(9):2733⑵740.

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